在SPE小柱的使用過程中有許多老師會(huì)疑惑流速問題。在通常的情況下，我們對(duì)于正常流速要求是0.5滴到1滴每秒。流速慢，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，流速快，有可能導(dǎo)致回收率不穩(wěn)定。那么今天我們就來深入討論一下影響SPE流速因素吧。

原因一：樣品制備問題

大多數(shù)流速問題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。比如樣品渾濁，離心過濾不充分導(dǎo)致上樣時(shí)候篩板堵塞，或者是樣品本身的蛋白等大分子物質(zhì)未經(jīng)過充分的處理，沒有進(jìn)行有效蛋白沉降，導(dǎo)致篩板堵塞。這類原因造成的流速問題可以通過改善前處理手段來解決。所以說樣品制備充分是保障SPE正常流速的第yi步。

原因二：小柱本身因素（填料粒徑和柱管體積）

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填料粒徑的影響

填料粒徑大填裝越松散，對(duì)流動(dòng)相阻力小，流速越快；粒徑越小，填裝越緊致，流速越慢。這種現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱上表現(xiàn)得很明顯。一般小柱填料粒徑的范圍是40-60um，農(nóng)殘級(jí)的弗羅里硅土粒徑范圍在75-150um，大孔硅藻土小柱600-900um。所以弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會(huì)比一般小柱流速快，尤其是大孔硅藻土小柱，使用時(shí)需要加上包裝中配套的導(dǎo)流針來控制流速。

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柱管體積的影響

對(duì)于同種填料的產(chǎn)品，當(dāng)填料量一定時(shí)，使用的柱管體積越小流速越慢。這是因?yàn)橹荏w積越小，橫截面小，填裝高度越高，所以流動(dòng)相阻力會(huì)增大，導(dǎo)致流速變慢。所以在實(shí)際檢測(cè)工作中，如果對(duì)上樣量和上樣流速有要求，在不影響固相萃取效果的前提下，可以選擇大體積柱管或者高通量的膜片裝置，CNW的DISK圓盤上樣速度可以達(dá)到50ml/min,在處理大規(guī)模水樣時(shí)有明顯的流速優(yōu)勢(shì)。

原因三：溶劑的選擇和使用

溶劑的選擇是很多老師在實(shí)驗(yàn)過程中容易忽視的點(diǎn)，比如：C18小柱，一般用甲醇活化，如果用水活化，由于C18的疏水性，水的浸潤(rùn)速度會(huì)慢于甲醇，導(dǎo)致流速變慢。遇到這種情況，調(diào)整活化溶劑就可以解決問題了。

溶劑使用順序也會(huì)影響流速，比如活化溶劑為二氯甲烷，平衡溶劑為水，由于二氯甲烷和水不互溶，所以活化平衡時(shí)流速就會(huì)很慢。這種情況我們建議在兩種不互溶的溶劑之間加入過渡溶劑甲醇，這樣就可以解決問題了。

原因四：空氣層影響

空氣層會(huì)阻礙液體的流路從而造成流速問題。篩板或者填料松動(dòng)是形成空氣層的主要原因。商品化的產(chǎn)品經(jīng)過運(yùn)輸?shù)竭_(dá)用戶手中，在運(yùn)輸過程中，填料和篩板間若發(fā)生了位移松動(dòng)，就容易形成空氣層。這種空氣層有時(shí)比較明顯，可以看到填料有斷層或者細(xì)縫。有時(shí)這種松動(dòng)不明顯，只能在小柱使用過程中感受到流速上的差異。這種情況下，輕微的松動(dòng)問題可以通過壓實(shí)篩板或者施加正負(fù)壓趕走空氣就可以解決了。

除了運(yùn)輸過程可能造成篩板松動(dòng)，在小柱的SPE洗脫程序中，如果在活化平衡階段不小心讓溶劑走干了，也會(huì)使填料中進(jìn)入空氣導(dǎo)致影響流速。這個(gè)時(shí)候通過加壓或者抽真空排走空氣就可以解決問題了。

總結(jié)下來影響小柱流速的因素主要有以下幾個(gè)：樣品制備，填料粒徑和柱管體積，溶劑選擇和使用以及空氣層的影響。當(dāng)然還會(huì)有一些別的影響因素， 各位老師在實(shí)驗(yàn)過程中如果有流速方面問題，可以先排查一下這些因素，也可以聯(lián)系我們安譜實(shí)驗(yàn)哦，我們的熱情24小時(shí)在線哦~