液相色譜填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng),通常為水、緩沖液與乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份先被沖洗出,而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
液相色譜填料是液相色譜技術(shù)的核心關(guān)鍵,應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,并對(duì)分離純化的結(jié)果和效率起著至關(guān)重要的作用,生產(chǎn)環(huán)節(jié)下游需通過(guò)分離純化提高產(chǎn)品的純度和收率,保障產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性;色譜/層析技術(shù)是實(shí)現(xiàn)分離純化的主要方式,而色譜填料/層析介質(zhì)及其工藝恰恰是影響色譜/層析效率重要的因素。
液相色譜填料固定相的選擇:
?。?)分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物可選擇極性鍵合相。
氰基鍵合相對(duì)雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性。
氨基鍵合相具有較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力,對(duì)某些多官能團(tuán)化合物如甾體、強(qiáng)心甙等有較好的分離能力;氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用,故被廣泛用于糖類的分析,但它不能用于分離羰基化合物,如甾酮、還原糖等,因?yàn)樗鼈冎g會(huì)發(fā)生反應(yīng)生成Schiff堿。
二醇基鍵合相適用于分離有機(jī)酸、甾體和蛋白質(zhì)。
?。?)分離非極性和極性較弱的化合物可選擇非極性鍵合相。
利用特殊的反相色譜技術(shù),例如反相離子抑制技術(shù)和反相離子對(duì)色譜法等,非極性鍵合相也可用于分離離子型或可離子化的化合物。ODS是應(yīng)用較為廣泛的非極性鍵合相,它對(duì)各種類型的化合物都有很強(qiáng)的適應(yīng)能力。短鏈烷基鍵合相能用于極性化合物的分離,而苯基鍵合相適用于分離芳香化合物。